SREBF1核内結合因子取得 実験2
細胞：3T3-L1-TetON-FLAG-mnSrebf1
(95%分化, Day5), 10cmディッシュ10枚
薬剤処理：2ug/ml Doxycycline, 21hr→2ug/ml Doxycycline/0.2mM TBHP, 22hr
核抽出
・ペレット量
・薬剤無し：600ul
・Dox：400ul
・Dox/TBHP：400ul
・蛋白量/濃度
・薬剤無し：1.58mg, 1.65mg/ml
・Dox：0.91mg, 1.83mg/ml
・Dox/TBHP：0.71mg, 1.34mg/ml
免疫沈降
・ビーズ量：10ul slurry
・反応時間：5時間
・洗浄：Buffer Dで7回→Elute Bufferで3回
SDS-PAGE
・ローディング量：免疫沈降産物の約1/10量
・ゲル：5-20% gradient gel (ATTO, E-T520L)
LC-MS/MS
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ヒット数 |
| 遺伝子 |
Accession |
Cont |
Dox |
Dox/TBHP |
| Srebf1 |
|
0 |
10 |
3 |
| Ubp1 |
Q811S7 |
0 |
4 |
0 |
| p300 |
B2RWS6 |
0 |
3 |
0 |
| Cebpb |
P28033 |
0 |
2 |
0 |
| Hdac2 |
A0A0R4J008 |
0 |
1 |
0 |
| Hdac6 |
Q9Z2V5 |
0 |
1 |
0 |
| Crebbp |
A0A0U1RQB6 |
0 |
1 |
0 |
| Kdm1a |
A3KG93 |
0 |
1 |
0 |
| Rbbp4 |
Q60972 |
0 |
1 |
0 |