3T3-L1-TetON-mGclc

薬剤誘導性Gclc発現3T3-L1作製
　一次感染
　　ウイルスベクター：pRetroX-Tet-On Advanced
　　宿主細胞：3T3-L1
　　selection：800ug/ml G418
　　　2日目：細胞死は認めないが、目視での細胞数はDay1>Day3>未感染
　　　4日目：細胞数はDay1>Day3。未感染細胞はほぼ全滅。
　二次感染
　　ウイルスベクター：pRetroX-Tight-Pur-mGclc(A534G/G1500A)
　　selection：5ug/ml puromycin + 400ug/ml G418
　　　1日目：未感染細胞で細胞死を認め、感染細胞との細胞数の違いが認められる
　　　3日目：未感染細胞は全滅。感染細胞では細胞死は殆ど見られない
　　maintenance：2ug/ml puromycin + 400ug/ml G418

Doxycycllin処理時の発現変化
実験1
　細胞：Day4, 95%分化
　　・3T3-L1-TetON-mGclc
　　・3T3-L1-TetON-Blank
　処理条件：5ug/ml Dox, 5days


実験2
　細胞密度：80% confluent
　Doxycycline処理濃度：500ng/ml
　処理時間：23hr

実験3
　細胞：分化誘導後4日目。95%分化
　Doxycycline処理濃度：2ug/ml
　処理時間：24hr、46hr