Cat promoter、Fabp4 promoterのルシフェラーゼアッセイ
結論:CEBPAを発現させるとPPARG/RXRの活性化が無くなる
細胞:3T3-L1 (70% confluent), 12well plate
トランスフェクション
plasmid
reporter
・Cat wt:pGL3-mCat(-9054), 100ng
・Cat mut:pGL3-mCat(-9054)-PPRE1/2mut, 100ng
・Fabp4:pGL3-Fabp4(-5.4kb), 100ng
transcription factor
・Mock:CMX, 300ng
・PPARG/RXRA:CMX-mPPARG, 100ng + CMX-mRXRA, 100ng + CMX, 100ng
・PPARG/RXRA/CEBPA:CMX-mPPARG, 100ng + CMX-mRXRA, 100ng +
pcDNA3-FLAG-CEBPA, 100ng
internal control
・CMV-Renilla, 2ng
lipofectamine 2000:2ul
細胞回収までの時間:46hr
リガンド処理:10uM Troglitazone, 42hr
