Cat promoter、Fabp4 promoterのルシフェラーゼアッセイ

結論:CEBPAを発現させるとPPARG/RXRの活性化が無くなる

細胞:3T3-L1 (70% confluent), 12well plate
トランスフェクション
 plasmid
  reporter
   ・Cat wt:pGL3-mCat(-9054), 100ng
   ・Cat mut:pGL3-mCat(-9054)-PPRE1/2mut, 100ng
   ・Fabp4:pGL3-Fabp4(-5.4kb), 100ng
  transcription factor
   ・Mock:CMX, 300ng
   ・PPARG/RXRA:CMX-mPPARG, 100ng + CMX-mRXRA, 100ng + CMX, 100ng
   ・PPARG/RXRA/CEBPA:CMX-mPPARG, 100ng + CMX-mRXRA, 100ng + pcDNA3-FLAG-CEBPA, 100ng
  internal control
   ・CMV-Renilla, 2ng
 lipofectamine 2000:2ul
 細胞回収までの時間:46hr
 リガンド処理:10uM Troglitazone, 42hr