Dexamethasoneの3T3-L1脂肪細胞におけるインスリンシグナルへの作用

細胞：3T3-L1 (70%分化)
分化条件：pioglitazone(-)
処理条件：1uM Dex or EtOH/DMEM/10%FBS, over night→DMEM(FBS-)でwash→1uM Dex or EtOH/DMEM(FBS-), 3hr→1uM insulin, 15min
Western blotting
　・ローディング量
　　・pAkt, Akt, IRS1：1.5ug
　　・β-actin：0.6ug
　・ゲル濃度
　　・pAkt, Akt, β-actin：12%
　　・IRS1：7.5%
　・1st Ab：4℃, over night
　　・pAkt：Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP (Cell Signaling, 4060, Lot 19), 1/2000希釈
　　・Akt：Akt Antibody (Cell Signaling, 9272, Lot 25), 1/4000希釈
　　・IRS1：1/2000希釈
　　・β-actin：β-actin antibody (Sigma, A5441), 1/4000希釈
　・2nd Ab：1/2000希釈
　　・pAkt, Akt, IRS1：Anti-rabbit Ig (GE, NA934V)
　　・β-actin：anti-mouse (GE, NA931V)