Srebf1のクロマチン免疫沈降
細胞:3T3-L1 (Day8, 50%分化)
処理条件:DMEM(H)/FBS(-)で2回wash→下記の薬剤を23hr処理
・Blank:DMEM(H)/FBS(-)
・Mev:10uM mevinolin
in DMEM(H)/FBS(-)
・Chol:10ug/ml
cholesterol+2ug/ml 25-hydroxycholesterol in DMEM(H)/FBS(-)
・HX/XO:0.6mM hypoxanthine+10mU/ml
xanthine oxidase in DMEM(H)/FBS(-)
・NAC:10mM NAC in
DMEM(H)/FBS(-)
クロマチン免疫沈降
抗体:anti-SREBP-1 (H-160) (Santa Cruz, sc-8984, Lot I0414), 2ug
DNA精製
・キット:PCR-M
・PX Buffer 1000ul使用
・WS Bufferで2回wash
・elution buffer 50ul
リアルタイムPCR
機種:7900HT
プライマー
・mActb promoter (mouse Actb promoter -250bp付近): GAGACATTGAATGGGGCAGT + ATGAAGAGTTTTGGCGATGG
・mScd1 SRE: TCACCCATCAGCCCACAG + CCTTGTCCTGCCTTTTCCATTG
