Srebf1のクロマチン免疫沈降

細胞:3T3-L1 (Day8, 50%分化)
処理条件:DMEM(H)/FBS(-)で2回wash→下記の薬剤を23hr処理
 ・Blank:DMEM(H)/FBS(-)
 ・Mev:10uM mevinolin in DMEM(H)/FBS(-)
 ・Chol:10ug/ml cholesterol+2ug/ml 25-hydroxycholesterol in DMEM(H)/FBS(-)
 ・HX/XO:0.6mM hypoxanthine+10mU/ml xanthine oxidase in DMEM(H)/FBS(-)
 ・NAC:10mM NAC in DMEM(H)/FBS(-)
クロマチン免疫沈降
 抗体:anti-SREBP-1 (H-160) (Santa Cruz, sc-8984, Lot I0414), 2ug
 DNA精製
  ・キット:PCR-M
  ・PX Buffer 1000ul使用
  ・WS Bufferで2回wash
  ・elution buffer 50ul
 リアルタイムPCR
  機種:7900HT
  プライマー
   ・mActb promoter (mouse Actb promoter -250bp付近): GAGACATTGAATGGGGCAGT + ATGAAGAGTTTTGGCGATGG
   ・mScd1 SRE: TCACCCATCAGCCCACAG + CCTTGTCCTGCCTTTTCCATTG