Oil Red O染色

6wellプレートの場合。【】内は24wellプレートの場合

1. 4% PFAあるいは10%ホルマリンを 作成する
2. (調製から時間がたっている場合は)Oil Red O溶液をMillex-HV Filter, 0.45um, PVDF (Millipore, SLHV033RS)で濾過する
3. 細胞をPBS 1ml【500ul】で2回洗う
4. 4% PFAあるいは10%ホルマリン 1ml【250ul】を加え、室温で10分インキュベート
5. MilliQ 1ml【500ul】で1回洗う
6. 60%イソプロパノール 1ml【250ul】を加え、1分インキュベート
7. 60% Oil Red O 1ml【250ul】を加え、15分インキュベート
8. MilliQ 1ml【500ul】で3回洗う
9. 32℃のエアインキュベーターで乾かす
10. カラーイルミネーター(フジカラー)の上に置き、デジカメで写真を取る
11. photoshopに取り込み、自動コントラスト処理をする

<吸光度による定量を行う場合>
12. ウェルにイソプロパノール500ul【100ul】を加える
13. 溶液を回収し、510nmで吸光度を測定する

<画像からの定量を行う場合>
12. 写真をphotoshopで開く
13. 自動レベル補正、自動コントラスト、自動カラー補正を行う
14. イメージ→色調補正→トーンカーブを開く
15. 三つ並んでいるスポイトの一番右を選択し、何もない領域(細胞のはがれた場所など)をクリックしてホワイトバランスし、保存
16. 画像をImageJで開く
17. Image→Color→Split Channelsをクリック
18. Red、Blue、Greenの画像が出てくるので、Green以外は閉じる
19. ウェル全体を選択し、Analyze→Measureをクリック
20. 出力した値を255から引き、これを測定値とする