〇Srebf1 リコンビナント精製

細胞:HEK293T (10cm, 60% confluent)

トランスフェクション
 ・プラスミド:10ug/dish
  ・pcDNA3.1-FLAG-mSrebf1
  ・pcRNA3.1-hARMC5-myc-His
 ・Lipofectamine 2000:25ul/dish
 ・Opti-MEM:700ul/dish
処理:トランスフェクション4hr後、培地交換→22hr後、ARMC5群に10uM MG132→3hr後、回収
タンパク抽出:TNE 500ul/dish
免疫沈降
 ・細胞量:10cm x 4枚
 ・ビーズ:40ul slurry
 ・時間:2hr
 ・洗浄:リコンビナントバッファー, 4回
 ・溶出:リコンビナントバッファー, 60ul
SDS-PAGE:9ul/well
染色:CBB