〇Srebf1 リコンビナント精製
細胞:HEK293T (10cm, 60% confluent)
トランスフェクション
・プラスミド:10ug/dish
・pcDNA3.1-FLAG-mSrebf1
・pcRNA3.1-hARMC5-myc-His
・Lipofectamine 2000:25ul/dish
・Opti-MEM:700ul/dish
処理:トランスフェクション4hr後、培地交換→22hr後、ARMC5群に10uM MG132→3hr後、回収
タンパク抽出:TNE 500ul/dish
免疫沈降
・細胞量:10cm x 4枚
・ビーズ:40ul slurry
・時間:2hr
・洗浄:リコンビナントバッファー, 4回
・溶出:リコンビナントバッファー, 60ul
SDS-PAGE:9ul/well
染色:CBB
