3T3-L1-TetON-FLAG-mnSrebf1 実験1
細胞:3T3-L1-TetON-FLAG-mnSrebf1
(99%分化, Day4)
薬剤処理:10ug/ml Doxycycline, 30hr
SDS-PAGE
サンプル量:500ul/6cm dishで回収→10ulをLoading
ゲル濃度:10%
ウェスタンブロッティング
一次抗体
・anti-FLAG M2-HRP (Sigma, A8592, Lot 093K9158), 1000倍希釈, R.T., 40min
・anti-SREBP-1 (H-160) (Santa Cruz, sc-8984, Lot I0414), 200倍希釈, R.T.,
1hr
二次抗体
・anti-rabbit Ig (GE, NA934V, Lot 9733716), 2000倍希釈, R.T., 40min
発光
・Pierce Western Blotting Substrate Plus
検出
・Amersham Hyperfilm ECL, 1min
