7900HT

THUNDERBIRD SYBR qPCR Mix (Toyobo)を使用する場合
1. 標準曲線用DNAをMilliQで3-4点分希釈する(標準曲線用DNAが無い場合は、測定サンプルのいくつかを混ぜたものを用いると良い)。
2. 以下の試薬をon iceで混ぜる。

THUNDERBIRD SYBR qPCR Mix (Toyobo, QPS-201)	10ul
50uM Primer 1	0.12ul
50uM Primer 2	0.12ul
50X ROX reference dye (Toyobo, QPS-201)	0.4ul
MilliQ	7.36ul
Total	18ul

3. MicroAmp Optical 96-Well Reaction Plate (AB, N801-0560) or MicroAmp Optical 384-Well Reaction Plate (AB, 4309849)にon iceで分注する。方向はA1→A12。
4. サンプル、標準サンプルを2ul加える。
5. Optical Adhesive Filmを乗せ、Compression Padでシールする。
6. プレートを1500r/minでvotexし、3000rpm 5minで遠心し、底に泡が無いことを確認する。
7. 7900HTのユニットを必要であれば交換する。
8. SDS 2.4を起動→File→New→96well plateの場合は、Containerを96wellsに変更→OK
9. Tools→Detector Manager→New→ReporterをSYBRにする→名前を入力→OK→Find→Copy to plate document→Done
10. ウェルをドラッグし、useにチェック
11. standardのウェルを選択し、Taskをstandardにし、濃度を入力。
12. Instrument→以下の条件に設定する。

95℃	1min
95℃	15sec	↓
65℃	30sec
72℃	1min	↑40 cycles

13. Sample Volumeを入力し、Add Dissociation Stage。
14. Real-time→Connect to Instrument→Open/Close→プレートをアダプターにセットし、96well plateの場合はCompression Padを乗せる。
15. Start Run→Yes→Save→OK。
16. Runが終了したら、プレートを取り出して捨てる。
17. SDSファイルを持ち帰り、Analyze→Dissociation Curve→ウェルを選択→Detectorを変更し、Dissociation Curveを確認する。
18. Results→Standard Curve PlotのDetectorを変更し、Slopeから増幅効率を算出する(50*10^(-1/Slope))。
19. File→Export→Results Table→Save→Excelで開く。
20. Wellを選択→データ→並び替え→最優先されるキーをWellにする→OK