アデノウイルス作成方法

1. pENTR1Aに発現させたい遺伝子を挿入する
2. 次の試薬を混ぜる

pENTR1A-目的遺伝子	80-100ng
pAd/CMV/V5-DEST (Invitrogen, 35-1301)	1ul
TE	up to 8ul
Total	8ul

2. Gateway LR Clonase II Enzyme Mix (invitrogen, 11791-020) 1ulを加え、室温で100minインキュベート
3. Proteinase K (invitrogen, 59895) 1ulを加え、37℃で10minインキュベート
4. 大腸菌にtranformationし、LBプレート(Amp+)でselectionする
5. colonyの一部分をLB(Amp+) 2mlに加え、colonyの残りをLB(Cam+) 2mlに加えて振とう培養する
6. シークエンスをし、目的遺伝子が挿入されている事を確認する

作成例