脂肪細胞面積測定

1. 脂肪組織をHE染色する。
2. BZ9000の電源を入れ、BZ-II観察アプリケーションを立ち上げる。
3. チャンネル設定→CH1-3をOFF→CH4を明視野→「オーバーレイ表示として使用」のチェックを外す→設定
4. 観察へ→オプション→自動保存をOFF
5. BZ9000にプレパラートを、カバーガラスが下になるようにセットする。
6. カラーを選択→2倍率にし、露光時間オートにし、サンプルを見つけて焦点を合わせる。
7. 4倍率にし、ホイールを転がして焦点を合わせる。
8. 20倍率(肥満マウスは10倍率)にし、ホイールを転がして焦点を合わせる
9. 画質改善→ヘイズリダクション→オートにし、画質を確認する。
10. ヘイズリダクションをOFFにし、撮影→保存。
11. 1サンプルにつき1-3視野の写真を撮る。
12. BZ9000の電源を切る。
13. BZ-II解析ソフトを立ち上げる→撮影したファイルを開く→ヘイズリダクション→保存
14. エリア計測→多角形→計測線を赤にする→脂肪細胞を囲む
15. 実行→表示詳細ラベルを黒、太いにする→計測結果を非表示にする→面積領域確認にチェック→エリアを選択→キャリブレーションをチェック→結果出力。
16. Excelでファイルを開き、Ctrl+F→置換→検索する文字列に「um2」を入力→すべて置換。
17. 3視野の各々の脂肪平均面積を算出し、サンプルの脂肪平均面積とする。
18. データ→並べ替えを行い、1-3視野の各々の脂肪面積分布(%)を算出し、平均してサンプルの脂肪面積分布(%)とする。
19. 個々の脂肪細胞の面積をπで割り、平方根を取り、半径を算出する(um)
20. 半径の3乗に4/3πを掛け、体積を算出する(um3)
21. 個々の脂肪細胞の体積を平均し、平均脂肪細胞体積を算出する(um3)
22. 脂肪組織重量(mg)に1000^3を掛け、平均脂肪細胞体積で割り算し、脂肪細胞数を算出する。