ARMC5とCOPAの共免疫沈降

細胞
　・HEK293T
　・前日：1.5 x 10^6/10cm→培養22hr
　・当日：70% confluent
トランスフェクション
　・プラスミド：7.5ug/dish
　　・pcDNA3.1-FLAG
　　・pcDNA3.1-FLAG-mArmc5
　・lipofectamine 2000：20ul/dish
　・培地交換までの時間：4hr
　・回収までの時間：29hr
蛋白調製
　・Lysis Buffer：1ml/dish
　・蛋白分解阻害剤：Proteinase Inhibitor Cocktail (Nacalai)
免疫沈降
　・FLAG-beads
　　・量：20ul slurry
　　・時間：2hr
　・洗浄：6回
　・溶出：FLAG peptide, 40ul
ウェスタンブロット
　・ゲル：7.5%
　・一次抗体：anti-COPA (H-3) (Santa Cruz, sc-398099, G2016), 1/100希釈, 4℃, over night
　・二次抗体：anti-mouse Ig (GE, NA931V, Lot: 17041904), 1/2000希釈