×Armc5ノックダウン　3T3-L1脂肪細胞　実験4

Reverse transfection
　細胞
　　・3T3-L1 adipocyte (分化停止後2日目, 90%分化)
　　・10cm x 1枚→6well x 1枚
　siRNA：60pmol/well
　　・AllStars Negative Control siRNA (Qiagen, 1027280)
　　・Mm_Srebf_1 (Qiagen, SI01433103)
　　・siArmc5 #1：Mm_Armc5_1 (Qiagen, SI00903791)
　　・siArmc5 #2：Mm_Armc5_3 (Qiagen, SI00903805)
　RNAiMAX：6ul/well
　培養時間：53hr
蛋白抽出：RIPA, 200ul
ウェスタンブロット
　ゲル：7.5%
　一次抗体：4℃, over night
　　・anti-SREBF1(2A4)(Santa Cruz, sc-13551, L1619), 1/200希釈
　　・anti-ARMC5 (Novus, NBP1-94024, F118163), 1/1000希釈
　　・anti-ACTB (Sigma, A5441), 1/5000希釈
　二次抗体
　　・SREBF1, ACTB：anti-mouse Ig, 1/2000希釈
　　・ARMC5：anti-rabbit Ig, 1/2000希釈