Armc5 過剰発現 HEK293T 実験2

細胞:HEK293T
 ・0.5 x 10^6/6cm→17hr後、50% confluent
トランスフェクション
 ・プラスミド
  ・pcDNA3.1-FLAG-mSrebf1, 1.5ug/dish
  ・pcDNA3.1-myc-His, 1.5ug/dish
  ・pcDNA3.1-mArmc5-myc-His, 1.5ug/dish
薬剤処理
 ・トランスフェクションから25hr後に処理→8, 22hr後にharvest
  ・DMSO
  ・10uM MG132
  ・200nM Bafilomycin A
  ・10ug/ml E64d + 10ug/ml Pepstatin A
ウェスタンブロッティング
 ・ゲル:7.5%
 ・Loading量:4.5ug/Lane
 ・抗体:4℃, O/N
  ・anti-FLAG M2-HRP (Sigma, A8592, 093K9158), 1/2000希釈
  ・Myc-tag (9B11) mAb (HRP conjugate) (Cell Signaling, 2040, 4), 1/1000希釈

結果
 ・MG132, 22hr処理群は、ほぼ全滅。