×Armc5　過剰発現　HEK293T　実験3

細胞：HEK293T (0.7 x 10^6/6cm→16hr後、90% confluent)
トランスフェクション
　・プラスミド
　　・pRK5-HA-Ub, 1.5ug/dish
　　・pcDNA3.1-FLAG-mSrebf1v1, 0.75ug/dish
　　・pcDNA3.1-FLAG-mSrebf1v3, 0.75ug/dish
　　・pcDNA3.1-FLAG-mSrebf1v3Δ1-78, 0.75ug/dish
　　・pcDNA3.1-myc-His, 0.75ug/dish
　　・pcDNA3.1-mArmc5-myc-His, 0.75ug/dish
　　・pcDNA3.1-mArmc5ΔN-myc-His, 0.75ug/dish
　　・pcDNA3.1-mArmc5ΔC-myc-His, 0.75ug/dish
　・lipofectamine 2000：8ul/dish
　・Opti-MEM：560ul/dish
Lysis：トランスフェクション28hr後、ユビキチンアッセイ用Lysis buffer 200ul→95℃, 10min→sonication, 10回→sample buffer添加→1M Tris-HCl (pH 7.8), 1/50量添加
ウェスタンブロット
　・ゲル：10%
　・抗体：4℃, over night
　　・anti-FLAG M2-HRP (Sigma, A8592, 093K9158), 1/2000希釈
　　・Myc-tag (9B11) mAb (HRP conjugate) (Cell Signaling, 2040, 4), 1/1000希釈