〇Armc5　過剰発現　HEK293T　実験8

細胞：HEK293T (6.5 x 10^5/6cm→20hr後、70% confluent)
トランスフェクション
　・プラスミド
　　・pcDNA3.1-PA-mInsig1, 0.75ug/dish
　　・プラスミド1, 1.5ug/dish
　　　・pcDNA3.1-HA
　　　・pRK5-HA-Ub
　　・プラスミド2, 0.75ug/dish
　　　・pcDNA3.1-FLAG
　　　・pcDNA3.1-FLAG-mSrebf1
　　・プラスミド3, 0.75ug/dish
　　　・pcDNA3.1-HA
　　　・pcDNA3.1-V5-mArmc5
　・Lipofectamine 2000：10ul/dish
　・Opti-MEM：560ul/dish
　・培地交換：4hr後
タンパク抽出：トランスフェクション28hr後、RIPA buffer
ウェスタンブロット
　・一次抗体：4℃, over night
　　・anti-FLAG M2-HRP (Sigma, A8592, 093K9158), 1/2000希釈
　　・anti-V5 (MBL, PM003, 011), 1/2000希釈
　　・anti-PA (Fujifilm Wako, 016-25861, CKQ0064), 1/1000希釈
　　・anti-ACTB (Sigma), 1/5000希釈
　・二次抗体
　　・anti-rabbit Ig (NA934V), 1/2000希釈
　　・anti-rat Ig (NA935V), 1/2000希釈
　　・anti-mouse Ig (NA931V), 1/2000希釈