×ARMC5とSREBF1　共免疫沈降　実験1

細胞：HEK293T
　・1.5 x 10^6/10cm→21hr後、80% confluent
トランスフェクション
　・プラスミド：3.75ug each
　　・pcDNA3.1-myc-His
　　・pcDNA3.1-mArmc5-myc-His
　　・pcDNA3.1-FLAG-mnSrebf1v1
　　・pcDNA3.1-FLAG-mSrebf1v1
　・Lipofectamine 2000：20ul, 4hr
　・培養時間：30hr
細胞溶解
　・TNE 1ml, 60min
　・proteinase inhibitor (Nacalai)
免疫沈降
　・anti-Myc (Cell Signaling, 2276, 24), 1ul, 6hr→Protein G Sepharose, 10ul, 2hr
　・溶出：50ul, boil
ウェスタンブロット
　・ゲル：10%
　・抗体：4℃, over night
　　・anti-FLAG M2-HRP (Sigma, A8592, 093K9158), 1/2000希釈
　　・Myc-tag (9B11) mAb (Cell Signaling, 2040, 6), 1/1000希釈



おまけ