×Armc5　ユビキチンアッセイ　実験2

トランスフェクション
　・方法：Reverse transfection
　・細胞：H295R (10cm, 50% confluent) x 1.5枚→10cm collagen dish x 1枚
　・プラスミド
　　・pRK5-HA-Ub, 10ug
　　・pcDNA3.1-FLAG, 10ug
　　・pcDNA3.1-FLAG-mArmc5, 10ug
　・lipofectamine 2000：40ul
　・時間：7hr
薬剤処理：transfection 26hr後から、10uM MG132, 4hr
免疫沈降
　・Lysis Buffer：400ul
　・時間：90min
ウェスタンブロット
　・ゲル：5-20%
　・一次抗体：4℃, over night
　　・anti-HA (Cell Signaling, 3724, Lot 9), 1/1000希釈
　　・anti-FLAG M2-HRP (Sigma, A8592), 1/2000希釈
　・二次抗体：anti-rabbit Ig, 1/2000希釈