血液からのRNA抽出

・NucleoSpin RNA Blood (TaKaRa, U0200A)使用
・血液の付着した器具はメスキュード缶に廃棄する

1. 1.5mlチューブにLysis Buffer DL 200ulを分注する。
2. 凍結血液をon iceで溶解し、すぐに200ulをLysis Buffer DLに加え、vortex。
3. Liquid Proteinase K 5ulを加え、Liquid Proteinase Kは-30℃に保存する。
4. サンプルを箱に入れ、vortex装置に固定し、強度8でvortex, 15min。
5. 70%エタノール200ulを加え、vortex。
6. 610ulをNucleoSpin RNA Blood Columnに加え、遠心11000g, 24℃, 1min。
7. カラムを新しい2ml Collection Tubeにセットし、Membrane Desalting Buffer 350ulを加え、遠心11000g, 24℃, 1min。
8. rDNase 95ulを加え、室温で15min。
9. Wash Buffer RB2 200ulを加え、遠心11000g, 24℃, 1min。
10. カラムを新しい2ml Collection Tubeにセットし、Wash Buffer RB3 600ulを加え、遠心11000g, 24℃, 1min。
11. カラムを新しい2ml Collection Tubeにセットし、Wash Buffer RB3 250ulを加え、遠心11000g, 24℃, 2min。
12. カラムを1.5ml Collection Tubeにセットし、RNase-free H2O 60ulを加え、遠心11000g, 24℃, 1min。
13. カラムを捨て、on ice。