Buffer D調製

1. 次の試薬を混ぜる。

		終濃度
1M HEPES-KOH (pH 7.5)	20ml	20mM
3M KCl	50ml	150mM
0.5M EDTA (pH 8.0)	400ul	0.2mM
Glycerol (nacalai, 17018-25)	100ml	10%
20% NP40	2.5ml	0.05%
超純水	827.1ml
Total	1L

2. 使用直前に、以下の試薬を加える
　・1Lに対し、Aprotinin 1430ul、10mg/ml Leupeptin 1ml、100mM PMSF 10ml
　・10mlに対し、cOmplete Mini, EDTA-free (Roche, 11836170001) 1粒
　・50mlに対し、cOmplete (Roche, 12780800) 1粒