〇細胞蛋白抽出　TNE Buffer　はがれにくい細胞

10cm【6cm】の場合

1. 遠心機を4℃にしておく。
2. 培地をアスピレートし、PBS 5ml【2ml】を加える。
3. PBSをアスピレートし、PBS 1ml【500ul】を加え、冷蔵庫に入れる。
4. 細胞をセルスクレイパーでエッペンに回収し、on ice。
5. 350-400g, 5min, 4℃で遠心し、上清を除き、on ice (-80℃ or 液体窒素→-80℃で保存可)。
6. 冷やしたTNE(proteinase inhibitor+) 1ml【500ul】を加え、ピペッティングし、rotation, 30min, 4℃。
7. 遠心12000g, 4℃, 10-15min。
8. 上清を回収し、蛋白溶液とする(-80℃で保存可)。
9. (Western blotに使う場合は) サンプルバッファーを加え、イン キュベート95℃, 5min (-30℃に保存可)。