〇CHO　Armc5 CRISPR　設計2　作製

トランスフェクション
　・細胞：CHO (6cm, 40% confluent)
　・プラスミド
　　・プラスミド1：4ug/dish
　　　・pCCC
　　　・pCCC-cArmc5
　　・プラスミド2：4ug/dish
　　　・pCCC-Armc5
　　　・EF1-Hygro-cArmc5-2
　・Lipofectamine 2000：20ul/dish
　・Opti-MEM：1mL/dish

経過
　・Day1：10% confluent, 400ug/ml hygromycin処理
　・Day7：pCCC-Armc5 + pCCC-Armc5群は全滅
　・Day10：pCCC-cArmc5+EF1-Hygro-cArmc5-2群は40% confluent、pCCC+EF1-Hygro-cArmc5-2群は10% confluent
　・Day13：1cell/96wellに限界希釈
　・Day21：12ウェルに継代

結果：28クローン中2クローンがhomoにrecombination

ウェスタンブロット
　・細胞：6 x 10^6/10cm→翌日、100% confluent
　・タンパク抽出
　　・RIPA 500ul
　　・タンパク濃度：3.1-4.13ug/ul
　・一次抗体
　　・anti-ARMC5 (Novus, NBP1-94024, F118163), 1/1000希釈
　　・anti-SREBP1 (Santa Cruz, sc-13551, H2024), 1/200希釈
　　・anti-SREBP2 (Merck, MABS1988, 4120677), 1/1000希釈
　　・anti-SCAP (Santa Cruz, sc-13553, L1622), 1/200希釈
　　・anti-INSIG1 (Santa Cruz, sc-390504, C1224), 1/200希釈
　　・anti-INSIG2 (Proteintech, 24766-1-AP, 00071240), 1/1000希釈
　　・anti-β-actin (Sigma, A5441), 1/5000希釈