Cul3　ノックダウン　実験2

細胞：3T3L1-TetON-mArmc5 (Day6, 99%分化)
トランスフェクション
　・10cm x 1枚→6cm x 2枚
　・細胞のピペッティング：30回
　・siRNA：300pmol/6cm
　　・AllStars Negative Control siRNA (Qiagen, 1027280)
　　・Mm_Cul3_4 (Qiagen, SI00962528) (AACAACTTTCTTCAAACACTA)
　・lipofectamine RNAiMAX Reagent：10ul/6cm
　・インキュベーション：24hr
薬剤処理：10ug/ml doxycycline, 28hr
蛋白抽出：Lysis Buffer 500ul/6cm→400ul回収
ウェスタンブロット
　・Loading量：1.5%
　・抗体：4℃, over night
　　・Myc-tag (9B11) mAb (HRP conjugate) (Cell Signaling, 2040, Lot: 4), 1/1000希釈
　　・anti-CUL3 (abcam, ab75851, Lot: GR150408-1), 1/20000希釈
　　・β-actin antibody (Sigma, A5441), 1/5000希釈
　・二次抗体
　　・anti-rabbit Ig (GE, NA934V, Lot: 17016966), 1/2000希釈