×full-length SREBF1　共免疫沈降　実験3

細胞：HEK293T (7x10^5/6cm→20hr後、75% confluent)
トランスフェクション
　・pcDNA3.1-V5-mArmc5, 1ug/dish
　・pcDNA3.1-PA-mInsig1, 1ug/dish
　・プラスミド1, 1ug/dish
　　・pcDNA3.1-FLAG
　　・pcDNA3.1-FLAG-mSrebf1v1
　・プラスミド2, 1ug/dish
　　・pcDNA3.1-myc-His
　　・pcDNA3.1/Hygro(+)-2xMyc-SCAP
　・lipofectamine 2000：10ul/dish
　・Opti-MEM：560ul/dish
タンパク抽出：トランスフェクション26hr後、TNE 200ul/dish
免疫沈降
　・ビーズ：20ul slurry/6cm x 2枚
　・時間：over night
　・wash：4回
　・溶出：FLAG peptide, 40ul
ウェスタンブロット
　・一次抗体
　　・anti-V5 (MBL, P003, 011), 1/2000希釈
　　・anti-FLAG-HRP (Sigma, A8592, 093K9158), 1/2000希釈
　　・anti-PA (Fujifilm Wako, 016-25861), 1/1000希釈
　　・anti-Myc-HRP (Cell Signaling, 2040, 6) 1/1000希釈
　　・anti-HA (Cell Signaling, 3724, 9), 1/1000希釈
　・二次抗体
　　・anti-Rabbit (NA934VS)
　　・anti-Rat (NA935V)