〇ゲノム抽出 組織

約35ugのgenomeが回収できる。

1. 次の試薬を1.5mlチューブに入れておく。


終 濃度
1M Tris-HCl (pH 7.8)
25ul
50mM
0.5M EDTA (pH 8.0)
100ul
100mM
4M NaCl
12.5ul
100mM
5% SDS
100ul
1%
20mg/ml proteinase K
12.5ul
0.5mg/ml
MilliQ
250ul




Total
500ul

2. マウスの尻尾約5mm or 組織一片を1.5mlチューブに入れる。
3. ブロックインキュベーターで55℃, over night。
4. フェノール/クロロホルム/イソアミルアルコール(nacalai, 25970-56) 700ulを加え、激しく100回振とうする。
5. 12000g, 24℃, 5minで遠心し、先を切ったチップで上層300ulを回収する。
6. (必要に応じて) 20mg/ml glycogen (nacalai, 17110-11) 1ulを加える。
7. エタノール600ulを加え、転倒混和し、12000g, 4℃, 5minで遠心し、上清を除き切る。
8. 75%エタノール500ulを加え、vortexし、12000g, 4℃, 5minで遠心し、上清を除き切る。
9. 75%エタノール500ulを加え、vortexし、12000g, 4℃, 5minで遠心し、上清を除き切る。
10. 風乾10minし、TE Buffer 100-500ulを加え、時々タッピングしながら65℃, 15min (-30℃に保存可)。