〇ゲノム抽出 組織
約35ugのgenomeが回収できる。
1. 次の試薬を1.5mlチューブに入れておく。
|
|
終
濃度
|
1M Tris-HCl (pH
7.8)
|
25ul
|
50mM
|
0.5M EDTA (pH 8.0)
|
100ul
|
100mM
|
4M NaCl
|
12.5ul
|
100mM
|
5% SDS
|
100ul
|
1%
|
20mg/ml proteinase K
|
12.5ul
|
0.5mg/ml
|
MilliQ
|
250ul
|
|
|
|
|
Total
|
500ul
|
|
2. マウスの尻尾約5mm or 組織一片を1.5mlチューブに入れる。
3. ブロックインキュベーターで55℃, over night。
4. フェノール/クロロホルム/イソアミルアルコール(nacalai, 25970-56) 700ulを加え、激しく100回振とうする。
5. 12000g, 24℃, 5minで遠心し、先を切ったチップで上層300ulを回収する。
6. (必要に応じて) 20mg/ml glycogen (nacalai, 17110-11) 1ulを加える。
7. エタノール600ulを加え、転倒混和し、12000g, 4℃, 5minで遠心し、上清を除き切る。
8. 75%エタノール500ulを加え、vortexし、12000g, 4℃, 5minで遠心し、上清を除き切る。
9. 75%エタノール500ulを加え、vortexし、12000g, 4℃, 5minで遠心し、上清を除き切る。
10. 風乾10minし、TE Buffer
100-500ulを加え、時々タッピングしながら65℃, 15min (-30℃に保存可)。