〇ゲノム抽出 細胞 10cm dish 2枚

1. 10cmディッシュ2枚をPBS 5mlずつでwashする。
2. PBS 1mlずつを加え、セルスクレーパーで回収し、1.5mlチューブ2本に回収する。
3. 遠心400g, 4℃, 5minし、上清を除く(-30℃に保存可)。
4. Genome lysis bufferを調製し、500ul/チューブを加える。
5. 時々vortexしながら、ブロックインキュベーターで55℃, 5min~over night。
6. フェノール/クロロホルム/イソアミルアルコール(nacalai, 25970-56) 700ulを加え、激しく100回振とうする。
7. 12000g, 24℃, 5minで遠心し、先を切ったチップで上層300ul/チューブを回収し、1本にまとめる。
8. フェノール/クロロホルム/イソアミルアルコール800ulを加え、激しく100回振とうする。
9. 12000g, 24℃, 5minで遠心し、先を切ったチップで上層300ulを回収する。
10. エタノール600ulを加え、vortexし、12000g, 4℃, 5minで遠心し、上清を除き切る。
11. 70%エタノール500ulを加え、vortexし、12000g, 4℃, 5minで遠心し、上清を除き切る。
12. 70%エタノール500ulを加え、vortexし、12000g, 4℃, 5minで遠心し、上清を除き切る。
13. 風乾10minし、Endotoxin-free TE buffer (Qiagen, 1018499) 1000ulを加え、時々タッピングしながら、65℃, 15min (-30℃に保存可)。