H295R-shARMC5作成
レンチウイルス作成
・HEK293T(1.4 x 10^6/10cm→22hr後、70% confluent)
・プラスミド
・pLKO.1
・shhARMC5-1 (TRCN0000153937)
・shhARMC5-2 (TRCN0000156262)
・shhARMC5-3 (TRCN0000156643)
・shhARMC5-4 (TRCN0000156769)
・shhARMC5-5 (TRCN0000157871)
・培養時間:トランスフェクションから26hr、71hr
・感染:全量→H295R (6cm) x 1枚
結果
感染後日数
|
pLKO.1
|
shARMC5-1
|
shARMC5-2
|
shARMC5-3
|
shARMC5-4
|
shARMC5-5
|
処理
|
Day2
|
|
|
|
|
|
|
5ug/ml puromycin
|
Day12
|
|
|
|
|
6cm (1%)
|
|
↓
|
Day20
|
RNA 21ug
|
RNA 32ug
|
10cm (2%)
|
RNA 42ug
|
|
RNA 15ug
|
↓
|
Day26
|
10cm (120%)
|
10cm (160%)
|
10cm (10%)
|
10cm (240%)
|
|
10cm (40%)
|
↓
|
