細胞免疫染色　共焦点レーザー顕微鏡　セルデスク　非標識一次抗体を用いる場合

1. 一次抗体を10% goat serum/0.1% PBST 250ulで希釈し、シールし、4℃, over night。
2. アスピレートし、0.1% PBST 500ulを加え、Orbital Shakerに乗せ、最大速度で5min。
3. 手順2を更に3回行う。
4. 蛍光付き二次抗体を10% goat serum/0.1% PBST 250ulで希釈し、10mM DAPI (AAT Bioquest, 17507) 1/1000量を加え、遮光してR.T., 1-2hr
5. アスピレートし、0.1% PBST 500ulを加え、アルミホイルで遮光し、Orbital Shakerに乗せ、最大速度で5min。
6. 手順5を更に3回行う。
7. MASコートスライドグラス(Matsunami, MAS-01)にFluoromount/Plus (Diagnostic Biosystems, K048-S) 7ulを滴下する。
8. セルデスクLF1を、ピンセット(メンブレンピンセットではない)でつまみ上げ、水気を除き、つまみをハサミで除き、裏返してスライドグラスに乗せ、遮光してover night。
9. セルデスクの表面を、70%エタノールで拭く。
10. 共焦点顕微鏡で観察する。