細胞免疫染色　共焦点レーザー顕微鏡　Cell Imaging Plateを用いる場合

1. Cell Imaging Plate, 96-well (Eppendorf, 0030741030)に細胞を播種する。
2. 細胞をPBS 200ulでwash
3. 4% PFA/PBS (nacalai, 09154-85) 100ulを加え、R.T., 10min。
4. PBS 200ulを加え、1min。
5. PBS 200ulを加え、1min以上。
6. 0.1% TritonX/PBS 100ulを加え、R.T., 10min。
7. 0.1% PBST 200ulを加え、1min。
8. 0.1% PBST 200ulを加え、1min。
9. 10% goat serum/0.1% PBST 100ulを加えR.T., 30min。
10. 一次抗体を10% goat serum/0.1% PBSTで希釈し、100ulを加え、シールし、4℃, over night (標識一次抗体の場合は遮光する)。

10. 0.1% PBST 1ml「500ul」で5min x 4回
11. 蛍光付き二次抗体を10% goat serum/0.1% PBSTで希釈し、1ml【500ul】「250ul」、10mM DAPI (AAT Bioquest, 17507) 1/1000量を加え、遮光してR.T., 1-2hr
12. 0.1% PBST 1ml「500ul」を加え、遮光して5min x 4回
13. PBS 2ml【1ml】「500ul」を加える。
14. 顕微鏡で観察する。

2. Fluoromount Plus 100ulを加え、蓋をし、遮光して4℃で保存。