細胞免疫染色　落射蛍光顕微鏡

6well【12well】「24well」の場合

1. 細胞をPBS 1ml【500ul】「500ul」でwash
2. 4% PFA/PBS (nacalai, 09154-85) 1ml【500ul】「250ul」を加え、R.T., 10min。
3. PBS 1ml「500ul」を加え、1min。
4. PBS 1ml「500ul」を加え、1min以上。
5. 0.1% TritonX/PBS-0.3% TritonX/PBS 1ml【500ul】「250ul」を加え、R.T., 5-10min。
6. 0.1% PBST 1ml「500ul」を加え、1min。
7. 0.1% PBST 1ml「500ul」を加え、1min。
8. 10% goat serum/0.1% PBST 1ml【500ul】「250ul」を加えR.T., 30min。
9. 一次抗体を10% goat serum/0.1% PBSTで希釈し、1ml【500ul】「250ul」加え、R.T., 1hr or シールして4℃, over night。
10. 0.1% PBST 1ml「500ul」で5min x 4回
11. 蛍光付き二次抗体を10% goat serum/0.1% PBSTで希釈し、1ml【500ul】「250ul」、10mM DAPI (AAT Bioquest, 17507) 1/1000量を加え、遮光してR.T., 1-2hr
12. 0.1% PBST 1ml「500ul」を加え、遮光して5min x 4回
13. PBS 2ml【1ml】「500ul」を加える。
14. 顕微鏡で観察する。