〇Insig1　共免疫沈降　実験2

細胞：HEK293T (1.9 x 10^6/10m→17hr後、80% confluent)
トランスフェクション
　・プラスミド：3.75ug each
　　プラスミド1
　　　・pcDNA3.1-mArmc5ΔC-myc-His
　　　・pcDNA3.1-mArmc5-myc-His
　　・プラスミド1
　　　・pcDNA3.1-FLAG
　　　・pcDNA3.1-FLAG-mnSrebf1v1
　　　・pcDNA3.1-FLAG-mSrebf1v1
　　　・pcDNA3.1-FLAG-mInsig1
　・Lipofectamine 2000：20ul
　・培地交換：4hr後
細胞回収：トランスフェクション後27hr
蛋白回収
　・TNE 500ul
　・Sonicationなし
免疫沈降
　・FLAGビーズ, 15ul slurry, over night
　・洗浄：4回
　・溶出：FLAG peptide 40ul
ウェスタンブロット
　・抗体：4℃, over night
　　・anti-Myc-HRP (Cell Signaling, 2040, 6), 1/1000希釈 in Can Get Signal Solution 2
　　・anti-Myc-HRP (Cell Signaling, 2040, 6), 1/1000希釈 in 3% skim milk
　　・anti-FLAG-HRP (Sigma, A8592, 093K9158), 1/2000希釈 in 3% skim milk