insulinによるAkt1リン酸化

細胞：3T3-L1 adipocytes (分化誘導後10日目)
insulin処理条件：DMEM(H)/FBS(-)で14.5hr→insulin処理10min
回収条件：Aprotinin + Leupeptin + PMSF + Na3VO4

条件1
ローディング量：10cmディッシュ1/180枚分
一次抗体：1/1000希釈
　・Phospho-Akt (Ser473) Antibody (Cell Signaling, 9271)
　・Akt Antibody (Cell Signaling, 9272)
二次抗体：Anti-rabbit Ig (GE, NA9340V), 1/2000希釈
発色
　・p-Akt：Pierce Western Blotting Substrate Plus, 1sec
　・Akt：Amersham ECL Western Blotting Detection Reagents, 3min


条件2
ローディング量：10cmディッシュ1/720枚分
一次抗体：Phospho-Akt (Ser473) Antibody (Cell Signaling, 9271), 1/2000希釈
二次抗体：Anti-rabbit Ig (GE, NA9340V), 1/2000希釈
発色：Pierce Western Blotting Substrate Plus, 1min