insulinによるMapk1/3リン酸化

細胞:3T3-L1 (分化誘導後8日目, 95%分化)
薬剤処理条件:DMEM(H)/FBS(-), over night→1nM insulin, 10min
回収条件:aprotinin/leupeptin/PMSF/Na3VO4

Western条件
 ・ゲル濃度:12%
 ・ローディング量:3ug
 ・ブロッキング:40min
 ・一次抗体:室温, 60min
  ・Phospho-p44/42 MAPK (Erk1/2) (Thr202/Tyr204) Antibody (Cell Signaling, 9101, Lot 13):1/1000希釈
  ・p44/42 MAPK (Erk1/2) Antibody (Cell Signaling, 9102, Lot 8):1/3000希釈
 ・二次抗体:Anti-rabbit Ig (GE, NA9340V), 1/2000希釈, 室温, 40min
 ・検出:Pierce Western Blotting Substrate Plus, 10min