〇in vitro ユビキチンアッセイ

1. 次の試薬をon iceで混ぜる。


終濃度
2.5mg/ml (約255uM) HA-Ubiquitin (R&D, U-110)
7ul
約45uM
0.436mg/ml (約3.7uM) UBE1 (R&D, E-305)
1ul
約90nM
1.22mg/ml (約55uM) UbcH6 (BPS Bioscience, 80316)
1ul
約1.4uM
0.95mg/ml (約8.5uM) CUL3/RBX1 (R&D, E3-436)
2.4ul
約500nM
100mM ATP (TaKaRa, 4041)
4ul
10mM
10 x Ubiquitylation buffer
4ul

基質
9ul

E3アダプタータンパク
9ul

超純水
2.6ul




Total
40ul

2. 37℃, 60分
3. 4xサンプルバッファー14ulを加え、95℃, 5min。