Kdm1aノックダウン 実験1
細胞:3T3-L1 (Day4, 100%分化)
処理条件:siRNA reverse transfection→23時間後、培地交換(抗生物質(-))±プラスミド導入→24時間後回収
siRNA導入条件
siRNA
・negative:AllStars Negative Control siRNA (QIAGEN, 1027280)
・Nampt:Mm_Pbef1_5 (QIAGEN, SI02674329)
・Kdm1a-1:Mm_Aof2_1 (QIAGEN, SI00233436) (AGGCTTGGACATTAAACTGAA)
・Kdm1a-3:Mm_Aof2_3 (QIAGEN, SI00233450) (ACGAGTTGCTACATTTCGAAA)
・Kdm1a-4:Mm_Aof2_4 (QIAGEN, SI00233457) (AAGCAAGCTCTTCTAGCAATA)
・Kdm1a-5:Mm_Aof2_5 (QIAGEN, SI02676562) (TGCAAGGAATATGATGAATTA)
トランスフェクション
・siRNA量:60pmol
・Lipofectamine RNAiMAX Reagent量:2ul
・総Opti-MEM量:200ul
・培地:抗生物質(-)
プラスミド導入
・レポーター:3xSRE-Luc, 100ng
・発現プラスミド
・CMV7, 300ng
・CMV-Srebp1a, 300ng
