〇形質転換 Ampicillin耐性プラスミド DH5α
1. LBプレート(Amp+) or LBプレート(Carbenicillin+)を室温に置いておく。
2. Competent High DH5αを氷上で溶かす。
3. DNA溶液をコンピテントセルに加え(4サンプルの場合、Competent High DH5α 24ulずつ)、on ice, 15min以上 (DNA溶液量はコンピテントセルの半分以下にする)。
4. 42℃, 50secし、on ice, 2min (42℃が長くなってしまっても問題無い)。
5. 超純水100-1000ulを加える。
・未切断プラスミド:1000ul
・oligoのligation:400ul
6. LBプレート(Amp+)に100ul滴下し、エタノールor70%エタノールに浸してライターで炙ったコンラージ棒で塗り広げる。
7. インキュベート37℃, 9hr-20hr or 33℃, 24hr or 室温, 48-70hr
8. 室温で保存(やむを得ない場合は4℃で1週間まで保存可)。