レンチウイルス作成

10000円/クローン

1. 共同研のサイトに移動→shRNAライブラリ配布→注文
2. 共同研10F中央実験室で大腸菌プレートを受け取り、アンピシリンでMaxi prepする(収量は20-125ugで不安定)。
3. HEK293T (10cm)にshRNAプラスミド4ug、psPAX2 3ug、pMD2.G 1ugを、lipoofectamine 2000 20ulでトランスフェクションする。
4. 培地を2回に分けて回収し、合わせる。
5. Steradisc 25 (Kurabo, S-2504)でフィルター濾過。
6. Lenti-X Concentrator (TaKaRa, 631231)を1/3量加え、4℃, over night。
7. 1500g, 4℃, 45minで遠心。
8. 上清を除き、培地を加え、感染させる。