LightCycler FastStart DNA Master SYBR Green Iを用いたLightCycler

1. 標準曲線用DNAをMilliQで3-4点分希釈する(標準曲線用DNAが無い場合は、測定サンプルのいくつかを混ぜたものを用いると良い)
2. 冷蔵庫で冷やしたLightCycler Centrifuge Adapters上で、以下の試薬を混ぜる。

SYBR Green	2ul
50uM Primer 1	0.2ul
50uM Primer 2	0.2ul
MgCl2 stock solution, 25mM	0.8ul
H2O, PCR grade or MilliQ	14.8ul
Total	18ul

3. LightCycler Centrifuge AdaptersにLight Cycler Capillariesをセットする
4. 操作2で調製した試薬を分注し、DNA溶液2ulを加える
5. 専用遠心機(TOMY, AR005-24)を用いて遠心800g, 4℃, 1min
6. Capillariesに蓋をセットする
7. LightCyclerを以下のように設定し、PCRをかける
　・Dissociation：Target Temperature 95℃, Incubation Time 10:00, Temperature Transition Rate 20.00, Secondary Target Temperature 0℃, Step Size 0.0, Step Delay 0.0, Acquisition Mode NONE
　・PCR (cDNA定量の時)

95℃	15sec	↓
65℃	5-10sec
72℃	15sec	↑40-50 Cycle

　・PCR (クロマチン免疫沈降の時)：

95℃	30sec	↓
65℃	30sec
72℃	1min	↑40-50 Cycle

8. 標準曲線がほぼ直線になっている事、解離曲線がsingle peakであることを確認する。
9. 標準曲線のSlopeから増幅効率を算出し、80-120%にある事を確認する(増幅効率=50*10^(-1/Slope))。