〇Lipofectamine 2000
・9cmディッシュの場合。【】は6cmディッシュ、『』は12wellプレートの場合
・DNA(ug):lipofectamine 2000(ul)は1:2-3にする
1. 1.5mlチューブのふたを開け、UV滅菌を15min以上。
2. plasmid 24ug【8ug】『1.6ug』以下をOPTI-MEM I (gibco, 11058) 700ul【280-500ul】『100ul』で希釈
3. lipofectamine 2000 Reagent (invitrogen, 11668-019) 20-60ul【8-20ul】『2-4ul』をOPTI-MEM I 700ul【280-500ul】『100ul』で希釈し、5-25min。
4. plasmid希釈液とlipofectamine希釈液を混合し、室温で5min-6hr。
5. 混合液を細胞に滴下し、37℃で4時間以上培養。
6. 抗生物質入りの培地に交換(HEK293T, 6cm dishの場合はアスピレートし、ピペットマンで添加)。