〇oligoをプラスミドに入れる
1. プラスミド1-2ugを、total 40ulの系で、1.5-3hr制限酵素処理し、CIAP (TaKaRa, 2250) 1ulを加え、37℃, 1hr。
2. oligoを
リン酸化/アニーリング
する。
3. 手順1のプラスミドを
精製
し、30ulで溶出する。
4. プラスミド2-2.5ulとoligo 2-2.5ulを
ライゲーション
し、
トランスフォーメーション
する。プラスミドのみのライゲーションも行う。