〇細胞培養　継代

9cmディッシュの場合

1. 培養メディウムを37℃にする。
2. 培地をアスピレートする。傾けてしばらく立てかけておき、底にたまってきた培地をもう一度アスピレートする。
3. PBSを5ml加え、少し撹拌し、アスピレートする。傾けてしばらく立てかけておき、底にたまっ てきたPBSをもう一度アスピレートする。
4. 0.25% Trypsin/1mM EDTA (nacalai, 35554-64) 1mlを加え、時折ディッシュの壁をたたきながら室温でインキュベート
5. 細胞が底からはがれたら、培地5mlを加えて回収し、チューブに入れる
6. 遠心1200rpm, 5min
7. 上清をアスピレートし、ペレットをタッピングして崩す
8. メディウムを加えてピペッティングし、ディッシュにまく。
9. 細胞が偏らないように揺らし(上下10回、左右10回、右斜め上左斜め下10回、左斜め上右斜め下10回、上3回、右3回、下3回、左3回)、CO2イン キュベーターに入れる。