マウス血中Leptin測定

マウスレプチン測定キット(モリナガ)を使用する場合

1. 25.6ng/ml レプチン標準溶液を検体希釈液で希釈し、25.6, 12.8, 6.4, 3.2, 1.6, 0.8, 0.4, 0ng/mlとする。
2. 抗体固相化プレートをフレームにセットし、ナンバリングする。
3. 洗浄液300ulを分注し、デカントした後キムタオルに数回叩き付ける。
4. 手順3を繰り返す。
5. 検体希釈液45ulを加える。
6. モルモット抗レプチン抗血清50ulを加える。
7. レプチン希釈液、マウス血漿5ulを加える。
8. タッピングして蓋をし、室温2hr。
9. デカントした後キムタオルに数回叩き付ける。
10. 手順3を5回繰り返す。
11. 酵素標識抗モルモットIgG抗体溶液100ulを加える。
12. タッピングして蓋をし、室温2hr。
13. 酵素基質溶液を室温に戻しておく。
14. プレートをデカントした後キムタオルに数回叩き付ける。
15. 手順3を7回繰り返す。
16. 酵素基質溶液100ulを加える。
17. 蓋をして遮光し、室温30min。
18. 反応停止液100ulを加える。
19. O.D.450nm-O.D.630nmを測定する。
20. 標準希釈液の濃度をlog変換して検量線を引き、濃度を算出する(ng/ml)