血中TBARS測定

1. TBA溶液を調整しておく(溶けにくい)。
2. 6M 1,1,3,3-Tetramethoxypropane (MDA) (Sigma, 108383)を1M Tris-HCl (pH 7.8)で希釈して4, 2, 1, 0.5, 0.25, 0.125, 0.0625, 0uMに調製し、200ulを分注してstandardとする。
3. 1M Tris-HCl (pH 7.8) 190ulに血漿10ulを加える
4. standard、サンプルにBHT溶液2.5ulを加える。
5.TBA溶液50ulを加え、vortex。
6. 95℃, 60minインキュベート(蓋が開かないように重りを乗せておく)。
7. on iceにし、1-Butanol (nacalai, 06016-85) 250ulを加え、vortex 10sec。
8. 3000g, R.T., 10minで遠心。
9. 上清100ulをblack plate (Thermo)に移す。
10. 蛍光プレートリーダーを用いて、励起515nm/測定553nmで測定する。