Pnpla2 CRISPR クローン作製

細胞：3T3-L1(50% confluent)
プラスミド
　・PX459-Cxcl12：標的配列CGCCAAGGTCGTCGCCGTGC
トランスフェクション
　スケール：6well
　プラスミド量：2ug
　lipofectamine 3000：4ul
　方法：forward transfection→4時間後に培地交換

結果
　薬剤選択
　　Day1：80% confluent。controlは100% confluent。2ug/ml puromycin処理
　　Day2：50% confluent。controlは100% confluent。
　　Day4：10cm dishに継代。puromycin終了
　　Day6：10% confluent。controlは1% confluent。

　全体のCxcl12発現



　サブクローニング
　　・14クローンの培地中Cxcl12を測定→2クローンが検出されず→2クローンとも、以下のゲノム変異
　　　CGCCAAGGTCGTCGCCGTGC→CGCCAAGGTCGTCGCCGC
　　・Pnpla2 GRE1：4/17クローンに変異→1/4クローンが、野生型の配列を持たず(下記)
　　
　　・Pnpla2 GRE2：4/32クローンに変異→1/4クローンが、野生型の配列を持たず(下記)