ポリアクリルアミドゲルの調製

1. 手袋をし、MB-00泳動プレート(ATTO)、MAB-10泳動プレート(ATTO)、RM10-12ミニコウム(ATTO)、RMS-01シールガスケット(ATTO)を洗剤で良く洗い、乾かす。

方法1
2. 分離ゲル用に次の試薬を混ぜる(ゲル濃度X%)

30% acrylamide/Bis	X/5ml
1.5M Tris-HCl (pH 8.8)	1.5ml
5% SDS	120ul
MilliQ	4.38-X/5ml
Total	6ml

3. 濃縮ゲル用に次の試薬を混ぜる。

30% acrylamide/Bis	400ul
0.5M Tris-HCl (pH 6.8)	1ml
5% SDS	80ul
MilliQ	2520ul
Total	4ml

4. 水分をキムワイプで完全に除き、ゲル板を組み立て、ラピダスマグネクリップミニ(ATTO)で留める。
5. コーム下端より約1.5cm下にマジックで印をつけ、コームを抜く。
6. 分離ゲルに20% APS 15ul、N,N,N',N'-テトラメチルエチレンジアミン(TEMED) (Wako, 205-06313) 6ulを加え、泡立たないようゆっくり転倒混和し、すぐにゲル板の印の所まで注ぐ。
7. すぐにピペットマンでMilliQをそっと重層し、左右に2-3回傾け、固まるまで静置。
8. 重層したMilliQを捨て、水滴をペーパータオルで吸いとる。
9. 濃縮ゲルに20% APS 20ul、TEMED 4ulを加え、泡立たないようにゆっくり転倒混和し、すぐにゲル板に注ぐ。
10. コームを刺し、溢れた部分はペーパータオルで吸いとる。
11. 固まったらゴムを取り、クリップを外し、コームを素早く抜き取り、ウェル部分をRO水で洗う(水でぬらしたペーパータオルにくるんでからラップで包むと、4℃で1カ月ほど保存可)。

方法2
4. 分離ゲル用に次の試薬を混ぜる

30% acrylamide	Xml
1M Tris-HCl (pH 8.8)	2.6ml
10% SDS	75ul
MilliQ	4.8-Xml
Total	約7.4ml

X=ゲル濃度(%)/4
5. 濃縮ゲル用に次の試薬を混ぜる

30% acrylamide	670ul
1M Tris-HCl (pH 6.8)	500ul
10% SDS	40ul
MilliQ	2.7ml
Total	約3.9ml

6. 分離ゲルに10% APS 75ul、N,N,N',N'-テトラメチルエチレンジアミン(TEMED) (Wako, 205-06313) 4ulを加え、泡立たないようゆっくり転倒混和し、すぐにゲル板の印の所まで注ぐ
7. すぐにピペットマンでMilliQをそっと重層し、左右に2-3回傾け、固まるまで静置
8. 重層したMilliQを捨て、水滴をペーパータオルで吸いとる
9. 濃縮ゲルに10% APS 40ul、TEMED 4ulを加え、泡立たないようにゆっくり転倒混和し、すぐにゲル板に注ぐ
10. コームを刺し、溢れた部分はペーパータオルで吸いとる
11. 固まったらゴムを取り、クリップを外し、コームを素早く抜き取り、ウェル部分をRO水で洗う
(水でぬらしたペーパータオルにくるんでからラップで包むと、4℃で1カ月ほど保存可)