〇蛋白定量

RIPA Bufferで測定可能

1. 2mg/ml Albumin Standard (Thermo, 23209)を、蛋白溶液と同じBuffer or 水を用いて0, 0.4, 0.8ug/ulに調製。
2. サンプルをBufferで適切に希釈する。
 ・3T3-L1脂肪細胞:約10倍希釈
 ・H295R (TNE buffer):3倍希釈
3. 以下の試薬を混ぜる。
Pierce BCA Protein Assay Reagent A (Thermo, 23228) 1ml
1.4ml
BCA Protein Assay Reagent B (Pierce, 1859078) 20ul
28ul



Total
1020ul
1428ul
4. 96wellプレート(Iwaki, 3860-096)にサンプル希釈液、Albumin希釈液を5ul加える
5. BCA混合液200ulを加え、インキュベート37℃, 20-60min
6. SH-9000Labを用い、562nmで吸光度測定
7. 検量線から濃度を算出する(ug/ul)
8. 手順2の希釈倍率を掛け算し、濃度を算出する(ug/ul)