〇細胞からのRNA抽出　12ウェルプレート　RNA STAT-60

1. 細胞のメディウムをアスピレートする(-80℃で保存可)。
2. RNA STAT-60 (TEL-TEST, CS-502) 500ulを加える。
3. 1000ulピペットマンで底をこすって細胞を溶かし、1.5mlチューブに移す(-30℃に保存可)。(同じプレートの他のウェルでまだ細胞培養する場合は、PBS 1mlで2回washする)
4. 手袋をし、クロロホルム100ulを加え、蓋を抑えながら上下に激しく約100回振とうし、3min静置。
5. 1.5mlチューブに、20mg/ml glycogen (nacalai, 17110-11) 2ulを加えておく。
6. 遠心12000g, 4℃, 15minし、上清150ulを1.5mlチューブに回収し、on ice (-30℃に保存可)。
7. イソプロパノール150ulを加えてvortexし、5min静置。
8. 遠心12000g, 4℃, 10minし、上清をピペットマンで除き、75%エタノール 500ulを加える(-30℃ or 4℃に保存可)。
9. 遠心12000g, 4℃, 5minし、上清をピペットマンで除き、75%エタノール 500ulを加える(-30℃に保存可)。
10. 遠心12000g, 4℃, 5minし、上清をピペットマンで除き、スピンダウンし、残った上清をピペットマンで除き切る。
11. 金属製のチューブ立てに移し、コンフォートタオルを被せ、風乾15-20minし、DEPC処理水(ナカライ, 36415-41) 15-50ulを加える。
12. 1.5mlチューブの壁を確認し、ペレットが付着している場合は、DEPC処理水を浸してしばらく置く。
13. 60℃, 10min。
14. 吸光度を測定し、DEPC処理水を加えてサンプルの濃度を200ng/ul以下に揃える。