リアルタイムPCR用プライマー設計　Primer 3を使用

1. Primer 3に移動する
2. 対象となるDNA配列をボックスに入力
3. Product Size Rangesを80-150 150-300に設定
4. Primer SizeをMin 17、Max 25に設定
5. Primer TmをMin 60、Opt 62、Max 65に設定
6. Max Tm Differenceを4に設定
7. Primer GC%をMin 40、Opt 50、Max 60に設定
8. Max Poly-Xを4に設定
9. Objective Function Penalty Weights for PrimersのTmをLt 0.5、Gt 0.5に設定
10. SizeをLt 0、Gt 0に設定
11. Self Complementarityを0.5に設定
12. 3' Self Complementarityを1に設定
13. Objective Function Penalty Weights for Primer PairsのTm Differenceを0.5に設定
14. Any Complementarityを0.5に設定
15. 3' Complementarityを1に設定
16. Primer Penalty Weightを0に設定
17. Pick Primersをクリック
18. 提示されたプライマーの3'側を、次のGorCまで延長したものを注文する。