〇細胞蛋白抽出　TNE Buffer　HEK293T　6cm dish

1. 遠心機を4℃にしておき、氷、液体窒素、セルスクレイパー、1.5mlチューブを用意する。
2. PBSを調製する。
3. 培地をアスピレートし、PBS 500ulを加える。
4. 細胞をセルスクレイパー(もしくはピペッティング)でエッペンに回収し、on ice。
5. 400g, 4℃, 5minで遠心し、上清を除く。
6. PBS 500ulを加え、タッピング。
7. 400g, 4℃, 5minで遠心し、上清を除く(液体窒素→-80℃で保存可)。
8. 冷やした蛋白分解阻害剤入りTNE 200-400ulを加え、ピペッティング。

細胞質/核質/膜タンパクを抽出する場合
9. rotation, 30min-1hr, 4℃

全タンパクを抽出する場合
9. Output 3でsonication, 10回

10. 遠心12000g, 4℃, 15minし、上清を回収する。
11. (Western blotに使う場合は) サンプルバッファーを加え、イ ンキュベート95℃, 5-10min (-30℃に保存可)。