〇細胞培養　凍結保存

9cmディッシュの場合

1. 培養メディウムを37℃にする。
2. 培地をアスピレートする。傾けてしばらく立てかけておき、底にたまってきた培地をもう一度アスピレートする。
3. PBSを5ml加え、少し撹拌し、アスピレートする。傾けてしばらく立てかけておき、底にたまっ てきたPBSをもう一度アスピレートする。
4. 0.25% Trypsin/1mM EDTA (nacalai, 35554-64) 1mlを加え、時折ディッシュの壁をたたきながら室温でインキュベート
5. 細胞が底からはがれたら、培地5mlを加えて回収し、チューブに入れる
6. 遠心1200rpm, 5min
7. 上清をアスピレートし、ペレットをタッピングして崩す。
8. セルバンカー1 (Biolabo, BLC-1) 1mlを加え、軽くピペッティングする
9. セラムチューブ(住友ベークライト)に入れ、-80℃に入れ、2日以上。
10. 液体窒素に細胞を入れる。
11. 発泡スチロール、ピンセットを持ち、気相タンクに移動し、保存する。